Bepaling van Uridine 5'-Monofosfaat in Voedingssupplementen door Hoge Prestatie Vloeistofchromatografie

Als nucleotide is Uridine 5'-monofosfaat (UMP) een cruciale intermediair in de nucleïnezuurmetabolisme binnen levende organismen. Het is het meest voorkomende nucleotide in zoogdiermelk, en de voedingsbehoefte voor uridylaat is significant hoger dan voor andere nucleotiden tijdens de groei en ontwikkeling van nakomelingen. De afgelopen jaren heeft onderzoek aangetoond dat UMP niet alleen deelneemt aan energiemetabolisme en RNA-synthese, maar ook de darmbarrièrefunctie verbetert door cellulaire signaleringsroutes te moduleren. Verder werkt het synergetisch met in vet oplosbare vitamines om de opname van voedingsstoffen en de immuunfunctie te bevorderen. UMP wordt vaak toegevoegd als voedingsversterker aan zuigelingenvoeding en vee-/pluimveevoer, waarbij de zuiverheid en concentratie direct van invloed zijn op de voedingswaarde en veiligheid van het eindproduct.

Sleutelwoorden:Voedingsversterker, UMP, Nucleotiden, High performance liquid chromatography.

1. Instrumenten en reagentia

1.1 Configuratie lijst van HPLC

Tabel 1 Configuratie lijst van HPLC

1.2 Reagentia en standaarden

Tabel 2 Reagentia en standaarden lijst

1.3 Experimenteel materiaal en hulpmateriaal

Ultrasone reiniger

Vortexmenger

2. Experimentele methode en voorwaarden

Chromatografiekolom: Nova Element AQC18, 5μm 4.6x250mm.

3. Experimenteel resultaat

3.1 Systeemgeschiktheidstest

De systeemgeschiktheidstest toonde aan dat de doelpiek goed gevormd was, met een hoog theoretisch plaatgetal en geen interfererende pieken in de buurt, waardoor aan alle experimentele vereisten werd voldaan.

Figuur 1 Chromatogram van de Uridine 5'-Monofosfaat Standaard Werkoplossing

Tabel 3 Testresultaten voor de Uridine 5'-Monofosfaat Standaard Werkoplossing

3.2 Herhaalbaarheidstest

De standaard werkoplossing van Uridine 5'-Monofosfaat (UMP) werd zes keer geïnjecteerd. De relatieve standaarddeviatie (RSD) van de retentietijd was 0,085% en die van de piekoppervlakte was 0,191%. Beide waarden lagen onder de gespecificeerde limiet van 2,0%, wat aantoont dat aan de experimentele vereisten werd voldaan.

Figuur 2 Chromatogrammen van de Uridine 5'-Monofosfaat (UMP) Herhaalbaarheidstest

Tabel 4 Herhaalbaarheidstestresultaten voor Uridine 5'-Monofosfaat (UMP)

3.3 Monstertest

De piekoppervlakte van de 5'-uridinemonofosfaat standaard werkoplossing (20 mg/L) was 322.525, terwijl die van de testmonsteroplossing 274.211 was. Op basis van de externe standaardmethode werd het UMP-gehalte in het monster bepaald op 17 mg/L.

Figuur 3 Chromatogram van het Testmonster

Tabel 5 Testresultaten van het Monster

3.4 Systeemgeschiktheidstest voor gerelateerde stoffen

De test van de systeemgeschiktheidsoplossing voor gerelateerde stoffen toonde aan dat alle verbindingspieken goed gevormd waren, met hoge theoretische plaatgetallen en een resolutie groter dan 2,0, waardoor aan de experimentele vereisten werd voldaan.

Figuur 4 Chromatogram van de 5'-uridinemonofosfaat (UMP) Standaard Werkoplossing

Tabel 6 Testresultaten voor de 5'-uridinemonofosfaat (UMP) Standaard Werkoplossing

3.5 Monster reproduceerbaarheidstest

Na zes opeenvolgende injecties van de systeemgeschiktheidsoplossing was de retentietijdherhaalbaarheid voor 5'-UMP, uracil en uridine respectievelijk 0,031%, 0,058% en 0,102%, terwijl de piekoppervlakteherhaalbaarheid respectievelijk 0,243%, 0,134% en 0,134% was, wat voldeed aan de experimentele vereisten.

Figuur 5 Chromatogram van de Monster Reproduceerbaarheidstest

Tabel 7 Testresultaten voor retentietijdherhaalbaarheid van gerelateerde stoffen

Tabel 8 Testresultaten voor piekoppervlakteherhaalbaarheid van gerelateerde stoffen

3.6 Gevoeligheidstest voor gerelateerde stoffen

De signaal-ruisverhouding van de 5'-UMP hoofdpiek in de gevoeligheidstestoplossing voor gerelateerde stoffen is significant groter dan 3, wat voldoet aan de experimentele vereisten.

Figuur 6 Chromatogram van de Gevoeligheidstestoplossing voor gerelateerde stoffen

Tabel 9 Testresultaten van de Gevoeligheidsoplossing voor gerelateerde stoffen

3.7 Testen van gerelateerde stoffen referentie- en monsteroplossingen

De piekoppervlakte van de referentieoplossing (17 mg/L) was 275.856. De totale piekoppervlakte van onzuiverheden in de testoplossing, exclusief 5'-uridinemonofosfaat, was 38.021. Berekening met de externe standaardmethode, het onzuiverheidsgehalte in het monster is 2.343 mg/L.

Figuur 7 Chromatogram van de Test van de Referentieoplossing voor gerelateerde stoffen

Tabel 10 Testresultaten van de Referentieoplossing voor gerelateerde stoffen

Figuur 8 Chromatogram van de Test van de Monsteroplossing voor gerelateerde stoffen

Tabel 11 Testresultaten voor gerelateerde monsteroplossing

4. Conclusie

In dit experiment, met verwijzing naar "GB 1903.69-2024 Nationale Voedselveiligheidsstandaard: Voedingsversterker 5'-Uridinemonofosfaat", werd de analyse uitgevoerd met behulp van een Wayeal LC3200 high-performance liquid chromatography systeem uitgerust met een ultravioletdetector. De experimentele resultaten tonen aan dat de systeemgeschiktheidstest goede piekvormen voor alle verbindingen, hoge theoretische plaatgetallen en een resolutie boven 2,0 aantoonde, wat voldoet aan de experimentele vereisten. De retentietijdherhaalbaarheid voor de 5'-Uridinemonofosfaat standaard werkoplossing en gerelateerde stoffen lag onder de 0,2%, en de piekoppervlakteherhaalbaarheid lag onder de 0,3%, wat duidt op een goede reproduceerbaarheid. De gevoeligheidstestoplossing voor gerelateerde stoffen toonde een signaal-ruisverhouding voor de 5'-Uridinemonofosfaat hoofdpiek die significant groter was dan 3, wat voldeed aan de experimentele vereisten. Alle testresultaten van de monsters waren normaal. De bovenstaande gegevens voldoen aan de instrumentvereisten die zijn gespecificeerd in de standaardmethode.