Bepaling van kinolonantibioticarestanten in kippenvlees met behulp van Wayeal's LCMS-TQ9200 vloeistofchromatografie-massaspectrometrie (LC-MS/MS) systeem
De nationale voedselveiligheidsstandaard van China "GB 31650-2019 Maximum Residue Limits for Veterinary Drugs in Foods" specificeert de maximale residulimieten (MRL's) van bepaalde kinolonantibiotica in voedselproducten van dierlijke oorsprong. Daarnaast specificeert "GB 31658.17-2021 National Food Safety Standard - Determination of Tetracyclines, Sulfonamides and Quinolones Residues in Foods of Animal Origin by Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry" de LC-MS/MS-analysemethode en bijbehorende kwantificatiegrenzen (LOQ's) voor 13 kinolonantibiotica. Deze applicatie-opmerking presenteert de succesvol gevalideerde resultaten voor de analyse van 13 kinolonantibioticarestanten in kippenvlees met behulp van Wayeal's LCMS-TQ9200 triple quadrupole vloeistofchromatografie-tandemmassaspectrometrie (LC-MS/MS) systeem.
Sleutelwoorden: LC-MS/MS, kinolonen, diergeneesmiddelresten, voedselveiligheid.
Wayeal LCMS-TQ9200 Vloeistofchromatografie-Tandemmassaspectrometrie Systeem
Vloeistofchromatografiemethode
Chromatografiekolom: C18 3.0x100mm
Mobiele fase: A: 0,1% mierenzuur methanol, B: 0,1% mierenzuuroplossing
Debiet: 0,4 ml/min
Kolomtemperatuur: 45°C
Injectievolume: 3 μL
Massaspectrometrie Methode
Tabel 1 Massaspectrometrie Ionbronparameters
| Ionbron |
ESI, positieve ionenmodus |
| Ionbronspanning |
5500V |
| Desolvatiegassnelheid |
18000 ml/min |
| Vernevelingsgassnelheid |
2000 ml/min |
| Gordijngassnelheid |
5000 ml/min |
| Botsingsgassnelheid |
800 μL/min |
| Desolvatietemperatuur |
450°C |
| Gordijngastemperatuur |
150°C |
Tabel 2 Massaspectrometrie Parameters voor Elke Verbinding
| Verbindingen |
Q1 |
Q3 |
Declustering Potential (V) |
Botsingsenergie (V) |
| Oxolinezuur |
262.1 |
244* |
100 |
25 |
| 160 |
100 |
50 |
| Flumequine |
262.1 |
202 |
115 |
44 |
| 244.1* |
115 |
24 |
| Norfloxacine |
320.1 |
302.1* |
90 |
27 |
| 233.2 |
90 |
33 |
| Enoxacine |
321.2 |
234 |
100 |
38 |
| 303* |
100 |
30 |
| Ciprofloxacine |
332.2 |
231 |
100 |
49 |
| 288 |
100 |
25 |
| Pefloxacine |
334.1 |
316* |
110 |
29 |
| 233.2 |
110 |
35 |
| Lomefloxacine |
352.1 |
265.1* |
110 |
31 |
| 334 |
110 |
29 |
| Danofloxacine |
358.1 |
340.1* |
100 |
32 |
| 283.1 |
100 |
32 |
| Enrofloxacine |
360.2 |
316.1 |
110 |
27 |
| 245.1* |
110 |
38 |
| Ofloxacine |
362.1 |
318.3 |
75 |
25 |
| 261.2* |
75 |
34 |
| Marbofloxacine |
363.2 |
72.1* |
100 |
25 |
| 345.2 |
100 |
29 |
| Sarafloxacine |
386.1 |
299.1* |
110 |
38 |
| 342 |
110 |
27 |
| Difloxacine |
400.2 |
299.1 |
110 |
38 |
| 382.2 |
120 |
30 |
Opmerking: Het ion gemarkeerd met * is het kwantitatieve ion
1. Experimenteel Resultaat
1.1 Piekvorm
De bepaling van 13 kinolonantibiotica werd binnen 11 minuten voltooid. Alle pieken hadden goede piekshapes zonder het veelvoorkomende tailing-fenomeenvan kinolonantibiotica. Alle verbindingen vertoonden sterke signaalresponsen, die voldeden aan de eisen voor experimentele kwantificatie.
Figuur 1 Chromatogram van 13 Kynolonantibiotica
1.2. Lineair Bereik
Een geschikte hoeveelheid kinolon gemengde standaardoplossing werd seriëel verdund om kalibratiestandaarden te bereiden met concentraties van 2 tot 500 ng/ml. De lineariteitsevaluatie toonde een uitstekende overeenstemming met de nominale concentraties, waarbij alle afwijkingen binnen de maximaal toelaatbare fout lagen. De bepalingscoëfficiënt (R²) varieerde van 0,9921 tot 0,9998, wat een bevredigende lineariteit voor alle componenten bevestigt.
Tabel 3 Lineair Bereik Tabel
| Verbindingen |
Lineair Bereik |
Lineaire Correlatiecoëfficiënt R2 |
| Oxolinezuur |
2-500ng/ml |
0.9989 |
| Flumequine |
2-500ng/ml |
0.9988 |
| Norfloxacine |
2-500ng/ml |
0.9968 |
| Enoxacine |
2-500ng/ml |
0.9989 |
| Ciprofloxacine |
2-500ng/ml |
0.9982 |
| Pefloxacine |
2-500ng/ml |
0.9992 |
| Lomefloxacine |
2-500ng/ml |
0.9921 |
| Danofloxacine |
2-500ng/ml |
0.9969 |
| Enrofloxacine |
2-500ng/ml |
0.9998 |
| Ofloxacine |
2-500ng/ml |
0.9941 |
| Marbofloxacine |
2-500ng/ml |
0.9997 |
| Sarafloxacine |
2-500ng/ml |
0.9946 |
| Difloxacine |
2-500ng/ml |
0.9973 |
Figuur 2 Lineair Bereik Resultaten voor Geselecteerde Kynolonantibiotica
1.3. Detectiegrens (LOD) en Kwantificatiegrens (LOQ)
De nationale voedselveiligheidsstandaard GB 31658.17-2021 specificeert een detectiegrens (MDL) van 2 μg/kg en de kwantificatiegrens (MQL) van 10 μg/kg. In deze methode vertoonden alle doelverbindingen signaal-ruisverhoudingen die significant groter waren dan 3 bij 2 μg/kg en 10 bij 10 μg/kg, volledig in overeenstemming met de gevoeligheidseisen die in de nationale standaard zijn gespecificeerd.
Tabel 4 Signaal-ruisverhoudingen voor detectie- en kwantificatiegrenzen van doelverbindingen
| Verbinding |
SNR (S/N) |
| 2 μg/kg |
10 μg/kg |
| Oxolinezuur |
111.26 |
359.11 |
| Flumequine |
59.64 |
244.73 |
| Norfloxacine |
70.16 |
392.57 |
| Enoxacine |
23.74 |
80.26 |
| Ciprofloxacine |
37.91 |
99.26 |
| Pefloxacine |
28.70 |
125.81 |
| Lomefloxacine |
48.54 |
165.84 |
| Danofloxacine |
105.74 |
348.10 |
| Enrofloxacine |
35.97 |
120.82 |
| Ofloxacine |
51.67 |
287.26 |
| Marbofloxacine |
190.11 |
399.38 |
| Sarafloxacine |
38.11 |
160.79 |
| Difloxacine |
25.85 |
149.29 |
Figuur 3 LOD/LOQ Chromatogrammen voor Geselecteerde Kynolonen
1.4. Precisietesten
Een gemengde standaardoplossing van kinolonantibiotica in drie concentraties (10, 50 en 100 ng/ml) werd 6 keer geïnjecteerd om de variaties in retentietijd en piekareaal te vergelijken. Zoals in de onderstaande tabel wordt getoond, vertoonden alle geteste kinolonverbindingen retentietijdafwijkingen van minder dan 0,3% en piekareaalafwijkingen van minder dan 5%, volledig in overeenstemming met de nationale standaardvereiste van RSD ≤15% voor precisie.
Tabel 5 Precisietesten van Verschillende Verbindingen
Figuur 4 Precisiechromatogrammen van Geselecteerde Verbindingen
2. Conclusie
Deze methode gebruikte het Wayeal LCMS TQ9200 vloeistofchromatografie-tandemmassaspectrometriesysteem voor de bepaling van kinolonantibiotica in kippenmonsters. De experimentele gegevens toonden uitstekende chromatografische prestaties met goed gedefinieerde piekshapes en afwezigheid van tailing voor alle analyten, terwijl werd voldaan aan de gevoeligheidseisen die in de nationale normen zijn gespecificeerd. De methode vertoonde een goede lineariteit met correlatiecoëfficiënten (R²) van meer dan 0,99 voor alle kalibratiecurves, samen met een uitstekende reproduceerbaarheid, zoals blijkt uit retentietijdafwijkingen van minder dan 0,3% en piekareaalvariaties van minder dan 5%. Analyse van drie onafhankelijk bereide kippenmonsterbatches toonde geen detecteerbare residuen van kinolonantibiotica. Deze resultaten bevestigen dat de analysemethode in combinatie met het Wayeal LC-MS/MS-systeem volledig in staat is om te voldoen aan de routinematige kwalitatieve en kwantitatieve detectie-eisen voor de doelanalyten in testmonsters.
Uw bericht moet tussen de 20-3.000 tekens bevatten!
