Bepaling van β-Agonist Residuen in Varkensvlees met behulp van Wayeal LCMS-TQ9200 Vloeistofchromatografie-Tandem Massaspectrometrie Systeem

Dit experiment verwijst naar "GB 31658.22-2022 National Food Safety Standard — Determination of β-Agonist Residues in Animal-Derived Foods by Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry" and utilizes the Wayeal LCMS-TQ9200 liquid chromatography-tandem mass spectrometry system to determine the content of β-agonists in porkUit de proefresultaten blijkt dat de geschiktheidstest van het systeem goed gevormde pieken en een goede lineariteit heeft aangetoond die aan de proefvereisten voldoen.De retentietijd herhaalbaarheid voor de β-agonist standaard werkoplossing was minder dan 1%.Voor de gevoeligheidstestoplossing van β-agonisten werden de signaal/geluidsverhoudingen van de belangrijkste pieken bij concentraties van 0 ± 0,0 g/cm3 gemeten..2ng/mL en 0,5ng/mL waren significant groter dan respectievelijk 3 en 10, waardoor aan de experimentele vereisten werd voldaan.

Bij de proef van varkensvlees werden geen β-agonisten aangetroffen..

Sleutelwoorden:Vloeibare chromatografie-tandem massa spectrometrie; β-agonisten; clenbuterol; voedselveiligheid.

1Instrumenten en reagentia

1.1 Configuratielijst van LCMS

Tabel 1 Lijst met instrumentconfiguratie

1.2 Reagentia en normen

Tabel 2 Lijst van reagentia en normen

1.3 Experimentele materialen en hulpmiddelen

Ultrasone reiniger

Vortexmixer

Waterbad met constante temperatuur

Centrifuge met hoge snelheid

2. Experimentele methode

2.1 Voorbehandeling van het monster

2.1.1 Enzymatische hydrolyse en extractie

Weeg 2 g van het monster (met een nauwkeurigheid van ±0,05 g) in een 50 ml centrifugebuis. Voeg 6 ml bufferoplossing van 0,2 mol/l ammoniumacetaat en 40 μl β-glucuronidase/arylsulfatase toe.en gedurende 16 uur op 37°C in het donker in een waterbad laten schuddenLaat afkoelen tot kamertemperatuur voor later gebruik.

2.1.2 Extractie, zuivering en concentratie

Neem de bereide oplossing, voeg 100 μL van de interne standaardwerkoplossing van 100 ng/mL toe, wervel om grondig te mengen en centrifugeer bij 8000 r/min gedurende 8 minuten.1 mol/l oplossing van perchloorzuurNa 8 minuten centrifugeren bij 8000 r/min wordt de pH van het supernatant ingesteld op 10 ± 0.5 met behulp van een natriumhydroxide-oplossing van 10 mol/l. Voeg 15 ml ethylacetaat toe, schud met gemiddelde snelheid gedurende 5 minuten en centrifugeer bij 5000 r/min gedurende 5 minuten. Verzamel de bovenste organische laag.toevoegen van 10 ml tert-butylmethylether, met gemiddelde snelheid gedurende 5 minuten schudden, met 5000 r/min gedurende 5 minuten centrifugen en de bovenste organische laag verzamelen. Alle organische lagen combineren en verdampen tot droogheid onder een stikstofstroom bij 50°C.Het residu wordt opgelost in 5 ml 2% mierenzuuroplossing en opzij gezet.. Bereid een vaste-fase extractiecolonne voor met mengmodus-kationenuitwisseling voor door deze opeenvolgend te activeren met 3 ml methanol en 3 ml 2% mierenzuur.opeenvolgend spoelen met 3 ml 2% mierenzuur en 3 ml methanol, en droogt onder vacuüm. Elueer de kolom met 3 ml 5% ammoniummethanoloplossing. Verdamp het eluat tot droogheid onder een stikstofstroom bij 50°C. Heroplos het residu in 0,5 ml methanol.1% oplossing van mierenzuur (10:90, v/v), grondig mengen en filteren door een microporeus membraan van 0,22 μm voor analyse door middel van vloeibare chromatografie-tandem massa spectrometrie.

2.2 Experimentele omstandigheden

2.2.1 Vloeibare chromatografische omstandigheden

Chromatografische kolom C18, 1,8 μm 2.1*100 mm

Mobiele fase: A: 0,1% mierenzuur in water; B: methanol

Stroom: 0,3 ml/min

Temperatuur van de kolom: 40°C

Injectievolume: 3μL

3Test van de geschiktheid van het systeem

De geschiktheidstest van het systeem toont aan dat de doelpieken goed gevormd zijn zonder interferentie van andere onzuiverheidspieken en aan de experimentele eisen voldoen.

Figuur 1 Chromatogram van zeven β-agonisten test (1 ng/ml)

3.2 Lineair bereik

Met behulp van standaardoplossingen van β-agonisten en werkoplossingen met een tussenconcentratie werd een standaardcurve in stappen opgesteld.met R2 > 0.99, wat wijst op een goede lineaire relatie.

Tabel 3 Tabel van lineaire waarden voor β-agonisten

Figuur 2 Standaardkromatogram van zeven β-agonisten

3.3 Limit of Detection (LOD) en Limit of Quantitation (LOQ)

Bij deze methode worden de detectielimiet (LOD) en de kwantitatielimiet (LOQ) voor β-agonisten vastgesteld op respectievelijk 0,2 ng/ml en 0,5 ng/ml. Voor elke verbinding in deze methode worden de volgende parameters vastgesteld:de signaal-geluidsverhouding bij de gespecificeerde concentraties voor LOD en LOQ groter is dan 3 en 10, respectievelijk voldoen aan de eisen inzake experimentele gevoeligheid.

Tabel 4 overeenkomstige signaal/geluidsverhoudingen voor LOD en LOQ van elke verbinding

Figuur 3 Ionchromatogrammen van zeven β-agonisten bij LOD- en LOQ-concentraties

3.4 Precisieproef

Een gemengde oplossing van β-agonist standaardstoffen in lage, middelgrote en hoge concentraties werd genomen en zes keer achtereenvolgens geïnjecteerd om de retentietijd en de afwijkingen van het piekgebied te vergelijken.De resultaten zijn weergegeven in de onderstaande tabelAlle β-agonisten vertoonden retentietijdsafwijkingen van minder dan 1% en piekgebiedsafwijkingen van minder dan 3%, wat voldoet aan de experimentele vereisten.

Tabel 5 Precisieproef voor elke verbinding

Figuur 4Precisie-testchromatogrammen van zeven β-agonisten (6 injecties)

3.5 Proefproef

De op de markt aangekochte varkensvleesmonsters zijn getest volgens de genoemde voorbehandelmethode en er zijn geen β-agonisten gevonden.Er werden geen chromatografische pieken waargenomen bij de retentietijden die overeenkomen met de zeven β-agonisten., terwijl de andere pieken de matrixsignalen na enzymatische hydrolyse vertegenwoordigen.

Figuur 5 Proefchromatogram van varkensvlees

4Conclusies

Deze methode maakt gebruik van het Wayeal LCMS-TQ9200 vloeibare chromatografie-tandem massaspectrometrisch systeem voor de bepaling van β-agonisten in varkensvlees.De gegevens tonen aan dat alle chromatografische pieken een goede vorm vertonen zonder staart, voldoet de gevoeligheid aan de experimentele vereisten, zijn de lineaire correlatiecoëfficiënten groter dan 0.99, en de nauwkeurigheid is bevredigend met retentietijdsafwijkingen van minder dan 1% en piekgebiedsafwijkingen binnen 3% voor zes opeenvolgende injecties van elke verbinding.Bij de proefproeven van varkensvlees werden geen β-agonisten aangetroffen.Deze resultaten wijzen erop dat de methode, die is uitgerust met het Wayeal LC-MS/MS-systeem, voldoet aan de routinematige kwalitatieve en kwantitatieve detectievereisten voor de doel-analyten.